elisa檢測試劑盒的三個基本原理 原鑫生物elisa綜合全類型試劑盒均價活動：￥699 
ELISA檢測試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫分析試劑盒，該試劑盒具有特異性高、靈敏度好、穩(wěn)定性高及操作簡便等特點，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、食品藥品檢測、農(nóng)產(chǎn)品測定等檢測領(lǐng)域，了解elisa檢測試劑盒的基本原理在其日常的使用過程中是十分必要的，這讓實驗操作者在使用ELISA試劑盒進行檢測時的操作流程更加規(guī)范并減少錯誤發(fā)生，進而在提高實驗結(jié)果準確度的同時提高了操作者對實驗的了解程度。接下來就介紹一下ELISA檢測試劑盒的原理及相關(guān)注意事項：
一、elisa檢測試劑盒的基本原理
1.抗原或抗體的固相化：將抗原（抗體）與固體表面通過蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分產(chǎn)生的吸附力而進行相互吸附，抗原（抗體）作為固相抗原（抗體），結(jié)合在固相載體表面的抗原（抗體）仍保持其免疫學(xué)活性，是ELISA檢測試劑盒中最為重要的基礎(chǔ)原理之一。 2.抗原或抗體的酶標記：酶標記抗原（或抗體）也是ELISA檢測試劑盒中的重要組成部分之一，抗原（或抗體）可通過共價鍵與酶結(jié)合形成酶標記抗原（或抗體），酶標記抗原或抗體同時保留了抗原（或抗體）的免疫學(xué)活性和酶的活性。酶標記抗原（或抗體）在顯色反應(yīng)中起著重要的作用。 3.待測物結(jié)合反應(yīng)過程：在測定過程中，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原（或抗體）進行結(jié)合反應(yīng)，使代測物質(zhì)也間接的固定在固相載體上。可以使用洗滌法將固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中游離的其他物質(zhì)進行分離，然后將酶標記的抗原（或抗體）加入到體系中，通過相關(guān)反應(yīng)間接地結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與代測標本中受檢物質(zhì)的量具有一定的比例關(guān)系，也就是說酶量越多代表著代測物質(zhì)的數(shù)量越多。 4.顯色反應(yīng)的發(fā)生：酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，加入酶反應(yīng)的底物，根據(jù)加入酶反應(yīng)底物后發(fā)生的顏色反應(yīng)來判定免疫反應(yīng)是否發(fā)生和代測物是否存在，并且反應(yīng)中顏色的深淺是與代測標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例關(guān)系的，所以底物顯色的程度能夠表示代測物質(zhì)的定性和定量檢測結(jié)果，代測物質(zhì)含量可以用紫外分光光度計或酶標儀進行測定分析。 5.ELISA試劑盒主要特征：ELISA檢測試劑盒法在原理上主要可以分為兩個方面，一是抗原與抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)原理基礎(chǔ)，二是酶標抗原（或抗體）與底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)的信號放大原理，這兩個方面使ELISA檢測試劑盒法同時具有較高的特異性和敏感性。
二、elisa檢測試劑盒主要類型分類
1.雙抗體夾心法：ELISA試劑盒的雙抗體夾心法中最重要的就是固相抗體和酶標抗體，首先將抗體固定在聚苯乙烯板上形成固相抗體，然后加入稀釋后的代測樣品，并進行洗滌，洗去游離的其他物質(zhì)，洗滌好之后加入酶標抗體，再次進行洗滌，加入相關(guān)底物形成顯色反應(yīng)，進而測出代測物質(zhì)（抗原）的含量。 2.競爭法測抗原：在使用ELISA試劑盒法測定小分子抗原或半抗原時，因小分子抗原或半抗原因位點的原因不能用雙抗體夾心法進行測定，所以采取競爭法進行檢測，其基本原理是標本中的待測抗原和酶標抗原共同與固相抗體進行競爭性結(jié)合，待測標本中目標抗原的含量越多，結(jié)合在固相上的酶標抗原就越少，顯色就會越淺，以此來對小分子抗原或半抗原的含量進行測定。 3.間接法測抗體：ELISA試劑盒檢測抗體一般選擇使用間接法，其基本原理為將已知抗原包被在聚苯乙烯板上，進行固定處理，將一定量的代測樣本稀釋液加入到已經(jīng)包被抗原的反應(yīng)板之中，代測抗體與固相抗原進行特異性結(jié)合，然后加入酶標記的抗抗體（二抗），二抗與代測抗體可以結(jié)合起來，這樣酶與底物產(chǎn)生的顯色反應(yīng)就可以反映出待測抗體的含量。
三、elisa檢測試劑盒的操作注意事項
1.試劑盒儲存：對ELISA檢測試劑盒進行儲存時應(yīng)將其放入4℃-8℃冷藏室內(nèi)進行保存，試劑盒從冷藏室中取出后應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后再進行使用。 2.加樣：加樣時盡可能縮短加樣之間的時間間隔，并且進行一次加樣的時間最好控制在5分鐘之內(nèi)，如果標本數(shù)量過多，盡量使用排槍進行加樣，可以縮短加樣操作時間，減少實驗誤差。 3.實驗操作：嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，并且保證操作臺及實驗環(huán)境的整潔與無菌，實驗后的所有樣品，洗滌液及廢棄物均按照傳染物進行處理。
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