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| 細(xì)菌總蛋白提取試劑盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號(hào)：YX-HU-74185
規(guī)格：48T/96T
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細(xì)菌總蛋白提取試劑盒 
細(xì)菌總蛋白提取試劑盒操作步驟： 1.首先取0.5mL 10X細(xì)胞裂解緩沖液，用去離子水稀釋至5mL 1X細(xì)胞裂解緩沖液。 2.以5000 xg離心10分鐘，收集表達(dá)目的蛋白的細(xì)菌。重新移動(dòng)培養(yǎng)基然后用1X PBS清洗顆粒。每100毫升細(xì)菌在4毫升1X細(xì)胞裂解緩沖液中重新懸浮細(xì)菌顆粒培養(yǎng)（OD600=1）。 3.添加40微升PMSF和80微升溶菌酶，將細(xì)菌懸浮液在37°C下培養(yǎng)30分鐘。 4.在搖動(dòng)平臺(tái)上培養(yǎng)混合物10分鐘。 5.添加20微升DNA酶/核糖核酸酶，繼續(xù)在37°C下?lián)u動(dòng)培養(yǎng)10分鐘。 6.通過(guò)在4°C下以3000 xg離心30分鐘的方式去除不溶性碎屑。收集超級(jí)游泳液（細(xì)胞裂解）緩沖液）在新鮮管中。 7.取10μl 2X SDS凝膠負(fù)載緩沖液和10μl細(xì)胞裂解緩沖液，混合煮沸，分析20μl，測(cè)定提取物含量通過(guò)10%SDS-PAGE進(jìn)行電泳。并將含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的部分儲(chǔ)存在-70°C或直接加載到凈化柱上。
細(xì)菌總蛋白提取試劑盒注意事項(xiàng)：
1.可以添加蛋白酶抑制劑，但在使用Ni2時(shí)不要添加EDTA或其他螯合劑+螯合劑破壞了柱結(jié)合組氨酸標(biāo)簽的能力。 2.可能需要將上清液通過(guò)一個(gè)0.45μm的過(guò)濾器，以防止在試驗(yàn)過(guò)程中樹脂堵塞凈化后。 3.細(xì)菌細(xì)胞也可以通過(guò)超聲波（3倍10秒）裂解某些蛋白質(zhì)，但是，在超聲波作用下，細(xì)胞會(huì)保持低溫超聲波治療。 4.建議在提取后盡快使用提取的蛋白質(zhì)。 5.溶解在異丙醇中的PMSF應(yīng)在-20°C下儲(chǔ)存。
細(xì)菌總蛋白提取試劑盒：http://www.shoushihepf.cn/products-375.html
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400-788-2680
